アムニン

CRF は、1981 年に Vale ら科学者によって羊の視床下部から初めて分離、精製されました。そのアミノ酸配列は次のとおりです。
H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr{{ 11}}フェ-ヒス-ルー-ルー-アルグ-グル-ヴァル-ルー-グル-メット{{21 }}ス-リス-アラ-アスプ-グレン-ロイ-アラ-グレン-グレン-アラ-彼の-セル-アスン-アルグ-リス-ルー-ルー-アスプ-イル-アラ-NH2
この配列は、分子量約 4.7 kDa の 41 アミノ酸を含み、N- 末端にセリン (Ser)、C- 末端にアラニン (Ala) のアミド化修飾が施されています。ヒツジ CRF とヒト CRF 間のアミノ酸相同性は 95% で、違いは位置 7、10、13、16、21、23、26、28、31、34、および 38 のみですが、機能は高度に保存されています。

CRF (ヒツジ) トリフルオロ酢酸 (CAS 番号: 79804-71-0) は、CRF のカルボキシル末端とトリフルオロ酢酸 (TFA) を結合させることによって形成される塩化合物です。 TFA 変更には次のような利点があります。

溶解度の向上: TFA の強酸性基 (- COCF ∝) により、有機溶媒中のペプチドの溶解度が高まり、実験操作が容易になります。
安定したペプチド構造: TFA は塩橋を形成することでペプチドの凝集と分解を軽減し、半減期を延長します。-。
生物学的活性の維持: 修飾された CRF は依然として CRF 受容体 (CRFR) に効率的に結合でき、天然分子の機能的特徴を保持します。

CRF (ヒツジ) トリフルオロ酢酸は通常、固相ペプチド合成 (SPPS) によって調製されます。SPPS では、アミノ酸側鎖が Fmoc または Boc 保護基で保護され、徐々に結合して直鎖ポリペプチド鎖を形成し、最後に TFA 樹脂で切断されて精製されます。品質管理基準には次のものが含まれます。

純度: 高速液体クロマトグラフィー (HPLC) は 98% 以上の純度を検出します。
分子量の検証: 質量分析 (MS) により、分子量が理論値と一致していることが確認されます。
生物活性アッセイ: in vitro 細胞実験 (AtT-20 下垂体腫瘍細胞など) を通じて、副腎皮質刺激ホルモン (ACTH) の分泌を刺激する能力を検証します。

CRF 受容体は B- クラス G タンパク質共役受容体 (GPCR) ファミリーに属し、CRF ₁ R と CRF ₂ R の 2 つのサブタイプが含まれます。
CRF ₁ R: 中枢神経系 (大脳皮質、海馬、扁桃体など) および末梢組織 (下垂体、副腎、胎盤など) に広く分布しています。
CRF ₂ R: 主に視床下部の室傍核、青斑核、脊髄、および心臓、血管、胃腸管などの末梢組織で発現します。
2 つの受容体間のアミノ酸配列の相同性は 70% に達しますが、リガンド結合特異性には違いがあります。CRF ₁ R は、ウロコルチン (UCN) ファミリーのリガンドに結合する傾向がある CRF ₂ R よりも CRF に対する親和性が高くなります。

受容体に結合した後、CRF は G s タンパク質を活性化することによってアデニル酸シクラーゼ (AC) 活性を促進し、細胞内アデノシン一リン酸 (cAMP) レベルの増加をもたらし、これによりプロテインキナーゼ A (PKA) および CREB ​​などの下流シグナル伝達分子が活性化されます。さらに、CRF は G q タンパク質を介してホスホリパーゼ C (PLC) を活性化し、カルシウムイオン (Ca 2 +) の動員とプロテインキナーゼ C (PKC) の活性化を引き起こします。
主要な信号ノードは次のとおりです。
CAMP PKA 経路: ACTH 分泌、グルコース代謝、および遺伝子発現を調節します。
Ca ² ⁺ - PKC 経路: ニューロンの興奮性調節とシナプス可塑性に関与します。
MAPK 経路: ERK1/2 リン酸化を通じて長期的な適応応答（神経細胞の生存など）を媒介します。{0}

CRF への長期曝露は、G タンパク質結合効率の低下と受容体のリン酸化として現れる受容体の脱感作を引き起こす可能性があります。 CRF ₁ R の脱感作は主に - アレスチン媒介エンドサイトーシスに依存しますが、CRF ₂ R のエンドサイトーシス効率は比較的低く、これは受容体の細胞内局在の違いに関連している可能性があります。エンドサイトーシスの後、受容体は細胞膜にリサイクルされるか、リソソームに進入して分解されます。これは受容体の機能恒常性を維持するために重要です。